利用巢式PCR对海南槟榔（Areca catechu L.）黄化病的初步检测
发布时间：2020-04-15
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周亚奎，甘炳春，张 争，隋 春，魏建和，杨 云，杨新全
中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所，海南兴隆 571533；
海南省南药资源保护与开发重点实验室，海南兴隆 571533；
中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193）
摘 要：通过对海南槟榔黄化病病原的研究，初步确定其病原物，对开展后续研究及防治策略提供依据。利用巢式PCR方法，对在海南3个市县采集的28个黄化病植株的不同组织进行了植原体检测，结果表明：在2个市县9个槟榔黄化病病株叶片中检测到了植原体，而在根和茎中没有发现植原体。将扩增片段克隆后测序得到1249 bp的完整植原体序列。利用MEGA3软件构建了系统发育进化树，同源性聚类发现其属于翠菊黄花组B亚组。初步判断发生在海南的槟榔黄化病是由于植原体引起。
关键词：槟榔；黄化病；植原体；巢式PCR
中图分类号：S43 文献标志码：A 论文编号：2010-1133
槟榔（Areca catechuL.）是中国四大南药之一，海南第二大经济作物，年产值达20亿元左右。槟榔在印度等国也大面积种植，全世界种植约56万hm。槟榔果不仅是咀嚼嗜好品，而且还有很好的药用价值。槟榔黄化病是一种毁灭性病害，在发病初期，植株下层2~3片叶叶尖开始黄化，黄绿部分分界较明显，后逐渐发展至整片叶黄化。经调查发现，旱季为症状表现最明显的时期（海南旱季为12月—翌年6月），而雨季来临时，症状有所缓解。发病植株花苞变小或不能展开，提早枯萎，少量结果，但果实变小，品质变差，基本没有商品价值。海南省最早于1981年发现槟榔黄化病，现已有超过20%的槟榔受害。迄今没有有效的防治手段来控制病害发生发展，一旦发现只能成片刨除已成株几年甚至几十年的结果株，损失非常严重。鉴于槟榔黄化病严重影响了槟榔种植生产，从发现槟榔黄化病至今，各国学者即开始其病原鉴定研究。经过研究发现，真菌、细菌、病毒、线虫等病原菌被排除，而最有可能导致此病害的病原为植原体。印度通过电镜观察，在槟榔黄化病病株筛管细胞中发现了植原体，由于当时病原检测技术限制，没有得到病原植原体的分离物及其基因序列信息，还无法对植原体的分类及致病机理等开展深入研究，进一步的研究也未见报道。2007年意大利的Charith等针对植原体病原对印度的槟榔黄化病病株进行了PCR检测，结果并未检测到植原体的存在。针对中国的槟榔黄化病，海南的罗大全等研究较早，并于2002年对其进行PCR检测，得到980bp的植原体序列，于2009年提交1200bp序列。笔者拟利用巢式PCR检测海南槟榔黄化病病株中植原体的有无，分析不同产地槟榔黄化病病株中是否均存在植原体，以期为后续深入研究病原与病症之间的因果关系奠定基础。在采样地点和时间的设计上采取了多地点、长时间采样检测，对结果综合评估，避免各种因素的干扰。
原文详见下方附件：
利用巢式PCR对海南槟榔(Areca catechu L.)黄化病的初步检测0327.pdf
